Оптимизация экспрессии и очистки рекомбинантного белка Apollo (SNM1B) с использованием аффинной хроматографии

Аннотация

Apollo (также известный как SNM1B) – нуклеаза, участвующая в стабилизации теломер и репарации ДНК, и его дисфункция связана с развитием ряда патологий, в том числе почечно-клеточной карциномы. Внимание к этому белку усилилось в связи с его потенциальной функцией в качестве мишени для противоопухолевой терапии. Настоящее исследование посвящено оптимизации экспрессии и очистки рекомбинантного белка Apollo (SNM1B) WT с помощью аффинной хроматографии. Для производства белка были использованы экспрессионные конструкции pET28c-hSNM1BcoCut и pETHSUL-hSNM1BcoCut, трансформированные в штаммы Escherichia coli (E. coli) Rosetta2 (DE3) и NovaXG. Вариации параметров индукции, таких, как концентрация IPTG, температура инкубации, присутствие детергента NP-40, глицерина, мочевины и продолжительность инкубации после индукции, были подвергнуты тщательному тестированию с целью определения оптимальных условий для получения растворимых рекомбинантных белков. Процесс очистки проводился с использованием аффинной хроматографии Ni-NTA. Чистота и растворимость белка оценивались с помощью SDS-PAGE. Полученные данные позволили определить эффективные условия для получения функционального и высокоочищенного белка Apollo, пригодного для дальнейших биохимических исследований, включая скрининг ингибиторов для онкотерапии.