Разработка протокола по определению видовой фальсификации пищевых продуктов методом полимеразной цепной реакции в режиме «реального времени»

Аннотация

Фальсификация мясных продуктов становится серьезной проблемой во всем мире, включая несоответствующую маркировку, запрещенные добавки или замену дорогих ингредиентов более дешевыми компонентами. Последствия таких манипуляций могут быть опасными для здоровья потребителя, например, пищевая аллергия, отравление. В данной статье разработан протокол для качественного определения ДНК митохондриального генома курицы (Gallus gallus) методом цепной реакции полимеразы в режиме реального времени в сырых и термически обработанных мясных продуктах.

Методы. Работа была проведена для определения смесей мяса и мясопродуктов из курицы, индейки, лошади, баранины, свинины и говядины. Для изучения фальсификации были подготовлены 11 образцов из 9 видов мяса и двух видов растений. С помощью комплектов изоляции ДНК PrepMan Ultra (Thermo Fisher, США) была получена ДНК с высокой концентрацией между 1 900 нг/мкл и 140 нг/мкл. Выбор специфичных праймеров и флуоресцентных зондов осуществлялся на основе выравнивания последовательности митохондриального гена курицы (Gallus gallus) в GenBank. Все цепи выровнены с помощью программного обеспечения Primer Designer 3.0 и синтезированы ThermoFisher.

Результаты. В ходе работы был разработан протокол по определению видовой фальсификации пищевых продуктов методом полимеразной цепной реакции в режиме «реального времени». Протокол ПЦР был протестирован на коллекцию образцов ДНК для определения специфичности, ПЦР с различным содержанием ДНК был поставлен для определения чувствительности. ДНК курицы была четко прослежена в матрице ДНК в пределах 0,01-10%.

Заключение. Исследования показали, что разработанный протокол является высокочувствительным и специфическим экспресс-методом определения ДНК курицы методом ПЦР «реального времени», что позволяет использовать их в диагностике выявления ДНК животных.